Tratamiento para descalcificación de huesos

Hueso molido frente a hueso descalcificado

Cuando hay minerales dentro de los tejidos, como el hueso y la dentina, o hay calcificación patológica en los tejidos blandos, es difícil obtener buenas secciones a partir de material incrustado en parafina o de muestras congeladas. En estos casos, es necesario eliminar los minerales del tejido mediante un proceso conocido como descalcificación, ya que en su mayoría son minerales de calcio. Sin embargo, hay casos en los que esto no es posible, o el tejido debe estar lo menos modificado posible, y las secciones se obtienen a partir del tejido mineralizado original (véase más adelante).

La hidroxiapatita es el mineral duro que se encuentra en los tejidos animales. Es un mineral de fosfato de calcio [Ca10(PO4)6(OH)2] que se encuentra entre las fibras de colágeno del tejido óseo. El mineral está en equilibrio con la solución saturada intersticial del tejido, según la reacción:

Si se elimina algún componente de la derecha, el mineral (de la izquierda) se disuelve para compensar la ecuación. Así funcionan las sustancias descalcificantes. La selección de las sustancias descalcificantes y el tiempo de incubación dependen del tipo de hueso que nos interese: hueso compacto o esponjoso. Por ejemplo, los minerales se disuelven lentamente en los huesos compactos.

Descalcificación de Edta

2 Sección de Genómica Funcional, Laboratorio de Biología Celular y del Desarrollo, Instituto Nacional de Investigación Dental y Craneofacial, Institutos Nacionales de Salud, 30 Convent Drive, Bethesda, MD 20892, USA

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El gen LacZ es ampliamente utilizado para investigar la actividad del promotor [13 – 15], sin embargo, no existe un protocolo detallado para el análisis óptimo de la actividad de la β-galactosidasa en dientes y huesos de ratón descalcificados. Además, los efectos de los descalcificadores a base de ácido y los diferentes fijadores utilizados para la preparación de muestras de dientes de ratón para analizar la actividad β-galactosidasa no han sido bien establecidos. En este informe, demostramos los efectos de varios fijadores y descalcificadores en las muestras de dientes de ratón para la actividad de LacZ, cuya expresión es impulsada por un promotor específico del diente DSPP (Dentin Sialophoprotein). Lo más importante es que hemos explorado los efectos de las temperaturas elevadas en las muestras de dientes de ratón para optimizar un método de desmineralización rápido pero suave, adecuado para el análisis de la actividad de LacZ. Esto demostrará ser un método adecuado para la desmineralización rápida de cráneos de ratón para el análisis mediante tinción histoquímica e hibridación in situ.

Solución de descalcificación

La descalcificación puede realizarse mediante el uso de ácido u otros agentes. Puede ser difícil descalcificar un bloque de hueso grande dentro del nuestro. La presente invención proporciona un agente de descalcificación ósea que incluye un agente de disolución de calcio para disolver los iones de calcio de los huesos, y un agente formador de burbujas para generar microburbujas cuando el agente de descalcificación ósea se expone a una vibración ultrasónica. Se ha descubierto que los huesos pueden descalcificarse en un tiempo relativamente corto utilizando el agente descalcificador de huesos de esta invención.

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3. El agente de descalcificación ósea de la reivindicación 2, en el que el agente de disolución de calcio es el ácido etilendiaminotetraacético en una cantidad del 0,0001% al 20% en peso en el agente de descalcificación mejorado por ultrasonidos.

11. Un método para detectar el contenido de hidroxiapatita de un espécimen óseo, siendo dicho espécimen óseo descalcificado mediante la inmersión del hueso en un agente descalcificador óseo y la exposición del hueso y del agente descalcificador óseo a la vibración ultrasónica, incluyendo los pasos de:

a) detectar al menos un parámetro acústico de la vibración ultrasónica a través del espécimen óseo; b) determinar el contenido de hidroxiapatita del espécimen óseo comparando la velocidad de transmisión detectada en el paso a) con velocidades de transmisión predeterminadas de huesos con contenidos de hidroxiapatita conocidos.

Solución de problemas de criosección

En la enfermedad de Crohn clínicamente activa, la mineralización ósea está alterada debido a la mala absorción de calcio por la pared intestinal inflamada, que se ve potenciada por la diarrea y el consiguiente tiempo de tránsito acelerado. A esto hay que añadir el acortamiento del intestino después de las operaciones, el suministro inadecuado de calcio en la dieta o posiblemente la eliminación de calcio en caso de intolerancia a la lactosa concurrente. El tratamiento con corticoides también provoca un deterioro de la mineralización ósea. Por ello, los autores evaluaron en 98 pacientes con enfermedad de Crohn la mineralización ósea, utilizando el método del índice óseo clavicular (NIBA). A continuación se inició un tratamiento: una dieta rica en proteínas, calcio forte, Ossin (fluoruro de sodio), vitamina D forte, anabolizantes y ejercicio físico regular. Los exámenes de control al cabo de un año revelaron que el índice se había normalizado en la mayoría de los pacientes (60,84%). Así pues, el tratamiento mencionado es eficaz. Sin embargo, debe ser regular y de carácter a largo plazo, en algunos pacientes debe extenderse durante muchos años. Sin embargo, también hemos tenido pacientes que, a pesar de haber sido sometidos a una amplia resección del intestino y tratados durante períodos prolongados con corticoides, tenían permanentemente un índice entre el 100 y el 120% sin tratamiento.

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